Внедрение в практику нового онкомаркера НЕ4

Качармина В.А., Сергеева С.М.

Определение опухолевых маркеров – важная составляющая современной лабораторной диагностики. Развитие этого направления тесно связано с появлением технологии получения моноклональных антител, иммуноферментного и иммунохемилюминесцентного анализа. В настоящее время под опухолевыми маркерами (онкомаркерами) понимаются специфические вещества, являющиеся продуктами жизнедеятельности злокачественных клеток или клеток, ассоциированных со злокачественным ростом, и обнаруживающиеся в крови и/или моче онкологических пациентов. В большинстве случаев это простые, либо модифицированные белковые молекулы, относящиеся к глико- и липопротеинам. Некоторые из них характерны только для одной опухоли (т.е. обладают опухолевой специфичностью), другие встречаются при различных опухолях.

Диагностическая надежность онкомаркеров оценивается рядом показателей, основными из которых являются диагностическая чувствительность и диагностическая специфичность.

Диагностическая чувствительность (ДЧ) лабораторного теста – это доля истинно положительных результатов в группе больных.

Диагностическая специфичность (ДС) отражает долю истинно отрицательных результатов в группе здоровых.

Повышение уровня онкомаркера может наблюдаться не только при злокачественном росте, но и при некоторых других патологических и даже физиологических процессах, и ДС отражает процент здоровых индивидуумов, у которых результаты детекции онкомаркера в сыворотке крови являются истинно отрицательными.

Показатели концентрации онкомаркеров в сыворотке крови пациента, установленные при помощи разных тест-систем, могут иногда существенно отличаться. Эти различия обусловлены использованием антител, взаимодействующих с разными эпитопами одного и того же антигена или в случае применения в тест-системах одинаковых антител - вследствие гетерогенной структуры исследуемого антигена, соответствующих эффектов матрицы и других причин.

К сожалению, до сих пор не охарактеризован ни один опухолевый маркер, обладающий 100% диагностической чувствительностью и 100% диагностической специфичностью по отношению к какому-либо одному органу.

Рак яичников (РЯ) является наиболее распространенной формой рака у женщин репродуктивного возраста во всем мире, а также основной причиной смерти от гинекологических злокачественных опухолей. При обнаружении заболевания на ранних стадиях прогноз благоприятный. Однако в 70% случаев заболевание диагностируется на более поздних стадиях, когда выживаемость очень низка. Только 10-30% таких пациентов живут более одного года.

До последнего времени в качестве основного онкомаркера при раке яичника рассматривалось определение в сыворотке крови маркера СА 125. Значение его для мониторинга, а именно для оценки ответа на проводимое лечение и раннего выявления рецидивов не вызывает сомнений. Уровень СА 125 повышен у > 80% всех пациенток с эпителиальным РЯ. Но его чувствительность на стадиях I/II невысока: повышенные значения СА 125 установлены не более чем у 50% пациенток. Кроме того, СА 125 не является строго специфичным маркером рака яичников, он может повышаться при доброкачественных гинекологических заболеваниях, при злокачественных опухолях других локализаций, у здоровых женщин репродуктивного возраста.

В настоящее время изучается возможность использования других онкомаркеров РЯ, в частности определение в сыворотке крови пациенток белка НЕ4. НЕ4 (белок 4 эпидидимиса человека) – кислый гликопротеин с молекулярной массой 25 кДа. Низкий уровень экспрессии этого белка установлен в нормальном эпителии репродуктивных органов, дыхательных путей и поджелудочной железы. Повышенная продукция белка установлена в ткани пораженного раком яичника.

Большинство исследователей отмечают более высокую чувствительность и специфичность НЕ4 в сравнении с СА 125. Однако особое значение для ранней диагностики рака яичников и дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных образований малого таза придается сочетанному определению СА 125 с другими маркерами. Показано, что именно комбинация СА 125 и НЕ4 является более точным прогностическим фактором наличия злокачественного образования, чем любой из маркеров в отдельности [1].

На основе значений концентраций СА 125 и НЕ4 разработан алгоритм расчета риска наличия эпителиального рака яичника у женщин с новообразованием в области малого таза - ROMA (Risk of Ovarian Malignancy Algorithm). При этом существуют отличия в расчете ROMA для женщин в пре- и постклимактерический период.

Как и для других онкомаркеров, метод определения НЕ4 должен обладать высокой аналитической чувствительностью, специфичностью и, что особенно важно при наблюдении динамики, - воспроизводимостью. Этим условиям удовлетворяет метод определения маркера, предлагаемый фирмой Abbott – одной из ведущих фирм в области лабораторной диагностики.

В лаборатории КДЛ Центральной поликлиники ОАО «РЖД» методика определения онкомаркера НЕ4 внедрена в практику с 2012 года. Исследование проводится на автоматическом иммунохимическом анализаторе ARCHITECT-1000 фирмы Abbott с использованием тест-системы «ARCHITECT HE4», предназначенной для количественного определения в сыворотке крови человека антигена НЕ4 методом хемилюминесцентного иммуноанализа на микрочастицах.

«ARCHITECT HE4» – это двухэтапный иммуноанализ. На первой стадии соединяются образец и парамагнитные микрочастицы, сенсибилизированные антителами 2Н5 к НЕ4. Антиген НЕ4, присутствующий в образце, связывается с микрочастицами, сенсибилизированными анти-НЕ4. После промывки на второй стадии для создания реакционной смеси добавляется меченный акридином конъюгат 3D8 анти-НЕ4. После следующего цикла промывки к реакционной смеси добавляются претриггерный и триггерный растворы. Возникающая в результате хемилюминесцентная реакция измеряется в относительных световых единицах (RLU). Между количеством антигена НЕ4 в образце и измеренными оптической системой ARCHITECT i* Sistem значениями RLU существует прямая зависимость. Результаты анализа выражаются в пмоль/л. Калибровка проводится согласно рекомендациям производителя тест-систем. Для контроля качества анализа используются аттестованные сыворотки с тремя уровнями концентрации НЕ4.

При интерпретации результатов анализа следует помнить об ограниченной специфичности теста: некоторые гистологические типы рака яичников (напр., мукоидные или герминогенные опухоли) редко экспрессируют НЕ4. С другой стороны, повышенные значения НЕ4 могут наблюдаться у женщин, не страдающих злокачественными заболеваниями.

Разработчики рекомендуют совместное использование тестов «ARCHI-TECT НЕ4», «ARCHITECT СА 125 II» и расчет ROMA для оценки риска развития эпителиального рака яичников у женщин с опухолевидными образованиями придатков матки. На основании ретроспективных клинических исследований были определены пороговые значения ROMA с учетом 75% специфичности для пациенток с опухолевидными образованиями яичников в зависимости от статуса по менопаузе.

Определение онкомаркеров СА 125 и НЕ4 проводилось нами в сыворотке крови пациенток, направленных врачами-гинекологами поликлиники с предварительным диагнозом киста яичника. Исследование на оба маркера проводилось одновременно и по результатам анализа согласно инструкции фирмы Abbott рассчитывался показатель ROMA. Всего исследовано 202 образца сыворотки крови пациенток. Среди исследованных образцов увеличение СА 125 было выявлено в 14 случаях, что составляет 7%; а НЕ4 – только в 2 случаях (1%), при этом результаты незначительно превышали референсные значения. Распределение пациенток на группы риска по величинам ROMA с учетом пороговых значений для пре- и постменопаузы представлены в таблице.

Полученные данные в целом совпадают с результатами клинических исследований, проведенными разработчиками тест-систем для пациенток с доброкачественными опухолями яичников. Однако следует отметить, что в группы высокого риска вошли пациентки как с нормальными значениями обоих онкомаркеров, так и с увеличенной концентрацией одного из них. Одновременного повышения уровня двух онкомаркеров в одном образце не наблюдалось. Дальнейшая работа с участием врачей-клиницистов позволит выявить высокий риск развития рака яичника в других группах пациенток по данным ROMA.

Таким образом, совместное использование тестов СА 125 и НЕ4 с вычислением ROMA может проводиться в лаборатории ЦП ОАО «РЖД» и помочь врачам-гинекологам в определении тактики ведения пациенток с патологией яичников.

Список литературы:

1. Силина И.А. НЕ4 – новый опухолевый маркер рака яичника. //Лаборатория No3, 2009. С. 16 – 17.